私信TA以下是RT-PCR内参跑不出来的一些常见根本原因: 内参没有被扩增出来:这可能是由于引物障碍、模板障碍或其他扩增条件不合适导致的. 综上所述,内参跑不出来的根本原因可能涉及多个方面.

2、又跑了另一次,由于曝光没有任何条带,将孵育过的膜重新做丽春红染色的影响 内参很好出来,一抗用水稀释都能孵育出来。建议 找老司机带,在这里是隔靴搔痒。我看的障碍是:整个过程中,从跑胶开始可能都存在障碍。 老司机看了不知道根本原因…由于是组织蛋白,如果蛋白降解了会出现这种障碍吗?由于我们用的是预成胶应该跑胶没有太大的障碍 2017-03-02 12:59 来自 iPhone/iPad客户端 举报 广告宣传推广 政治敏感、违法虚假信息 恶意灌水、重复发帖 违规侵权、站友争执 附件异常、链接失效 其他 丁香园旗下网站 关于丁香园

今天把内参和目的基因放在一管里,影响只跑出目的基因条带(我用了目的基因的退火温度54度先跑30s,后再跑内参退火温度53度30s,由于内参退火温度我不是很确定,所以分别设了三管在52°,52.9°,53.7°)在正常组织的.我反转录后P出来的产物分别摸了内参和目的基因的退火温度,摸的时候,选择电泳图上有条带的还比较亮的作为退火温度.

如果家禽细胞蛋白内参跑不出来,可以从以下几个方面排查根本原因: 一、样本相关 1. 样本质量 - 检查蛋白样本是否存在降解障碍,蛋白降解可能导致内参无法跑出。例如,样本采集后保存不当,或者保存时间过长等都可能引起蛋白降解。可以先跑胶考马斯亮蓝染色先看一眼,确定下样品质量。 2. 样本处理方式 - 确认样本处理方式过程是否正确,比如裂解液的使用是否合适等。不同的家禽细胞可能需要特定的裂解条件,如果裂解不充分或者过度裂解都可能影响内参的检测。 二、电泳相关 1. 电泳条件 - 检查电压、电流、电泳时间是否合适。不合适的电泳条件可能导致内参无法正常显示。例如,电压过高

最近请人帮我做Western-blot,用我自己从小鼠脾脏提取的细胞,影响连内参都跑不出条带(但是PCR却有影响),可是换成其它细胞株,同样的实验条件和抗体,却能跑出理想的条带。.xbingfeng呃,我只遇到过一两次类似的障碍,有几个样品放了很久, 跑胶看不出明显降解,但是beta-actin也检测不出来.

这种情况可能是由于你没有连接正确,所以导致的这个障碍,你可以检查一下接下来,就是在连接的一个状态里面可以查看一下自己的设置是否正确。

一、内参定量跑不出来可能的根本原因 - 样本相关 - RNA质量障碍:如果是从RNA反转录后进行的内参定量,RNA的质量不佳可能导致内参跑不出来。例如RNA可能发生了降解,虽然在某些实验中测了OD值,但没有跑电泳确认其完整性,而RNA降解会影响反转录的效率,进而影响内参的定量影响。就像在一些细胞RNA提取实验中,如果操作不当,如悬浮细胞洗涤次数过多或者未按照正确的方式处理方式细胞,都可能导致RNA降解。 - 模板量障碍:即使BCA定量有浓度,但内参仍跑不出来,可能是实际用于反应的模板量不合适。如果模板量过少,可能无法满足定量反应的需求;而模板量过多可能会产生抑制

反转录障碍或RNA降解 如果内参(如actin)无法扩增,可能是反转录过程出现障碍,或者RNA在提取后已经降解. 引物障碍 内参引物可能存在设计或质量障碍,导致无法扩增.

3.你自己的内参跑不出来有可能是你内参引物的障碍,但是如果别人的内参你也跑不出来感觉一定是你总RNA的障碍,或者是在反转录过程中没有按标准操作(防RNA降解和冰上操作).先排除试剂的障碍(过期否)2.你用的总RNA的量似乎比较大,但是应该也在试剂盒说明的范围中了.但是不知道你提完RNA后有没有跑电泳看看RNA的完整性,其实RT-PCR最关键的就是如何保证总RNA(mRNA)不被降解,其他的都是比较

2021-04-01 10:38:24上样量大内参太亮了吧.很细 然后我们进行连在一起 没跑开的话 目标蛋白的条带还挺好的是咋回事ߥ�.